Тестування на ретровіруси

Методи виявлення

Принципи методу

Регуляторний фокус

Аналіз спільного культивування

У цьому методі використовуються чутливі клітини-індикатори для захоплення інфекційних вірусних частинок і визначення статусу зараження шляхом спостереження за такими явищами, як цитопатичні ефекти, фокальне утворення або експресія специфічного антигену. Він може продемонструвати наявність інфекційних ретровірусних частинок.

• Обов’язкові об’єкти тестування: клітини EOPC або камери-з обмеженим проходженням.

• Основна процедура тестування: необхідно використовувати дво{0}}систему спільного культивування (фазу ампліфікації вірусу та фазу індикатора активності).

• Вимоги до чутливих клітин: залежно від виду та походження клітин, що тестуються, для аналізів ретровірусної інфекційності необхідно використовувати різні або кілька чутливих клітинних ліній.

• Вимоги до культурального пасіву: систему спільного культурального -посіву необхідно пасувати принаймні 5 разів (зазвичай більше), щоб забезпечити адекватну ампліфікацію потенційного вірусу.

Трансмісійна електронна мікроскопія

У цьому методі використовується трансмісійна електронна мікроскопія з високою{0}}роздільністю для безпосереднього спостереження за морфологією та структурою вірусних частинок (таких як типова ікосаедрична структура оболонки та морфологія нуклеокапсиду), що дозволяє візуально ідентифікувати та кількісний аналіз. Він може виявляти відомі та невідомі вірусні частинки, у тому числі частки, що не -реплікуються, або ті, які не вловлюються аналізами на інфекційність.

• Обов’язкові об’єкти тестування: клітини EOPC або камери-з обмеженим проходженням.

• Основна вимога: тип і кількість ретровірусних частинок повинні бути визначені.

• Вимоги до зразків: потрібен ультратонкий зріз, який зазвичай потребує систематичного спостереження принаймні 200 клітин.

• Special provisions (Chinese Pharmacopoeia 2025): For certain rodent cells (e.g., CHO, BHK-21) or insect cells, the amount of viral particles in the harvest fluid and their infectivity should also be determined.

Аналіз зворотної транскриптази

На основі характеристик зворотної транскриптази, що каталізує синтез ДНК з матриці РНК, наявність ретровірусів можна опосередковано визначити шляхом виявлення радіоактивних або флуоресцентних сигналів продуктів реакції для кількісного визначення активності ферменту. Цей метод не залежить від вірусної інфекційності та може здійснювати широкий скринінг на вірусні частинки з ферментативною активністю.

• Пояснення щодо винятків: як у ICH Q5A(R2), так і в Китайській фармакопеї (видання 2025 р.) чітко зазначено, що цей тест не є обов’язковим для клітин, які, як відомо, продукують ретровіруси (таких як певні клітини гризунів, комах і птахів).

• Альтернативні вимоги: у випадках звільнення необхідно провести більш повний тест на тип вірусних частинок, кількість та інфекційність.

ПЛР або інші специфічні методи in vitro

Виходячи з видової специфічності клітин, коли результати активності зворотної транскриптази нечіткі або не можуть бути виміряні, можна використовувати -видоспецифічні методи виявлення ретровірусу, такі як ретровірусна ПЛР, імунофлуоресценція, ELISA тощо. Кількісну ПЛР ретровірусів також можна використовувати для кількісного визначення ретровірусних частинок.

• Первинне позиціонування: зазвичай використовується як важливе доповнення до основних методів, згаданих вище, та інструмент для підтвердження специфічності.

• Сценарії застосування: зазвичай використовується для високочутливого виявлення та кількісного визначення конкретних відомих вірусів (наприклад, кПЦР) або для надання доказів на молекулярному -рівні, коли результати інфекційності/електронної мікроскопії сумнівні.

• Регуляторна основа: його застосування потребує ретельної валідації та має відповідати відповідним рекомендаціям щодо валідації конкретних методів виявлення на цільовому ринку (наприклад, Китайська фармакопея (видання 2025)).

Професійні послуги

Комплексний захист для вас

Глобальний підхід до відповідності

Наші методи тестування глибоко інтегровані з основними вимогами ICH Q5A(R2), Китайської фармакопеї (2025), USP та EP, забезпечуючи-комплексну послугу, що охоплює тестування на інфекційність, трансмісійну електронну мікроскопію (ТЕМ) і виявлення активності зворотної транскриптази, ефективно підтримуючи одночасне застосування в кількох регіонах, включаючи Китай, США та Європу.

Широкий{0}}спектр виявлення

У нас є різноманітні чутливі клітинні лінії та розроблені методи для різних сценаріїв ризику, які можуть ефективно виявляти цільові патогени, включаючи ретровіруси мишей, ретровіруси тропізму та ретровіруси комах, забезпечуючи широкий спектр і специфічність виявлення.

Власна платформа для електронної мікроскопії

У нас є власний просвічуючий електронний мікроскоп із високою-роздільністю та старша професійна технічна команда для забезпечення замкнутого{1}}контролю якості протягом усього процесу від підготовки зразка до виведення даних. Ми також можемо надати швидкі кількісні послуги для сировини (UPB) для точної підтримки подальшої перевірки очищення від вірусів.

Комплексна валідація методу

Усі методи виконуються відповідно до стандартів GMP/GLP із суворим дотриманням Китайської фармакопеї (видання 2025 р.) та ICH Q2(R2) для всебічної перевірки специфічності, меж виявлення тощо. Ми надаємо повний-цикл управління проектом від розробки протоколу до підтримки додатків, забезпечуючи відповідність даних і надійність.

Захист цілісності даних

Ми створили повну систему якості, яка відповідає принципам GMP і ALCOA+, від отримання зразків і проведення експерименту до видачі звіту. Завдяки професійному -перегляду даних і надійному механізму контролю відхилень (CAPA) ми гарантуємо високу{3}}якість і перевірку виконання кожного проекту.